Porcint Akut Diarré Syndrom Coronavirus (SADS-CoV) er en nyopdaget svine enterisk patogen coronavirus, der kan forårsage vandig diarré hos nyfødte smågrise og forårsage betydelige økonomiske tab for svineindustrien.På nuværende tidspunkt er der ingen egnet serologisk metode til at evaluere effektiviteten af SADS-CoV-infektion og -vaccine, så der er et presserende behov for at bruge en effektiv enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) for at kompensere for denne mangel.Her blev et rekombinant plasmid, der udtrykker SADS-CoV spike (S) protein fusioneret med humant IgG Fc domæne, konstrueret til at producere rekombinant baculovirus og udtrykt i HEK 293F celler.S-Fc-proteinet renses med protein G-harpiks og bevarer reaktiviteten med anti-humane Fc- og anti-SADS-CoV-antistoffer.Derefter blev S-Fc-protein brugt til at udvikle indirekte ELISA (S-iELISA) og optimere reaktionsbetingelserne for S-iELISA.Som et resultat, ved at analysere OD450nm-værdien af 40 SADS-CoV-negative sera bekræftet ved immunofluorescensassay (IFA) og Western blotting, blev cut-off-værdien bestemt til at være 0,3711.Variationskoefficienten (CV) af de 6 SADS-CoV positive sera inden for og mellem kørsler af S-iELISA var alle mindre end 10 %.Krydsreaktivitetstesten viste, at S-iELISA ikke har nogen krydsreaktivitet med andre porcine virussera.Baseret på påvisningen af 111 kliniske serumprøver var den samlede sammenfaldsrate for IFA og S-iELISA desuden 97,3 %.Virusneutraliseringstesten med 7 forskellige OD450nm-værdier af serum viste, at OD450nm-værdien påvist ved S-iELISA var positivt korreleret med virusneutraliseringstesten.Til sidst blev der udført S-iELISA på 300 serumprøver fra svinebedrifter.Kommercielle sæt af andre porcine enterovira viste, at de IgG-positive rater af SADS-CoV, TGEV, PDCoV og PEDV var henholdsvis 81,7 %, 54 % og 65,3 %., henholdsvis 6 %.Resultaterne viser, at S-iELISA er specifik, følsom og reproducerbar og kan bruges til at påvise SADS-CoV-infektion i svineindustrien.Denne artikel er beskyttet af ophavsret.alle rettigheder forbeholdes.
Indlægstid: 22-jun-2021